Wie funktionieren bestimmte gentechnische Methoden, die dringend benötigte Ergebnisse liefern sollen? Welches Verfahren ist für ein Experiment am besten geeignet? Welche Kontrollen sind sinnvoll? Wie genau muss ein Puffer angesetzt werden und wie war das noch mal mit der Reihenfolge im Pipettierschema? In der 5. Auflage dieses bewährten Laborhandbuches werden molekularbiologische Methoden in Form von eindeutigen und reproduzierbaren Arbeitsvorschriften präsentiert, um die täglichen Hürden des Laboralltags zu meistern. Es richtet sich an Bachelor-, Master- oder Diplomstudierende sowie an Technische Assistenten, die neue Methoden etablieren wollen, und erfahrene Wissenschaftler zum schnellen Nachschlagen. Die Autoren sind in Lehre und Forschung oder in der Industrie tätig und geben hier ihr Wissen und ihre jahrelange Laborerfahrung weiter. Die meisten Methoden und Rezepte sind erfolgreich etabliert, andere wurden erst aktuell eingeführt. Zu Beginn eines jeden Abschnitts wird der Leser über die wichtigsten Konzepte informiert. Es folgt ein praktischer Teil mit Arbeitsanleitungen, die Schritt für Schritt das Erlernen und genaue Anwenden der Methoden ermöglichen. Besonderer Wert wurde auf Sicherheitshinweise und das Aufzeigen möglicher Fehlerquellen gelegt. Inhaltsübersicht: 1 Allgemeine Methoden 2 Gelelektrophoresen 3 Isolierung von DNA 4 Polymerase-Kettenreaktion (PCR) 5 Klonierung von cDNA (cDNA-Genbank) 6 Klonierung von genomischer DNA (genomische Genbank) 7 Isolierung und Markierung von RNA 8 RNA-Interference 9 Gewebepräparation 10 Detektion von Protein und Nucleinsäure auf Membran 11 In situ-Hybridisierung 12 Transfektion von Säugerzellen 13 Transformationsmethoden für filamentöse Pilze 14 Genexpression in E coli und Insektenzellen: Reinigung rekombinanter Proteine 15 Das Pichia pastoris-Expressionssystem 16 Verminderung der Genexpression über Ribozym-Targeting 17 Analyse der Genregulation 18 Peptidarrays auf Cellulosemembranen 19 Genexpressionsanalyse mit Microarrays 20 Text- und sequenzbasierte Datenbank-Abfragen in der Bioinformatik Anhang 1 Sequenzierung von DNA Anhang 2 Proteinidentifizierung und Sequenzierung In der 5. Auflage wurden neben der Überarbeitung der grundlegenden Kapitel zu den molekularbiologischen Methoden die Kapitel zu RNAi, Bioinformatik und zu Microarrays deutlich ausgebaut. Ein Kapitel zur Fixierung und Aufbereitung von Gewebe ist neu hinzugekommen. Damit ist dieses Buch wiederum ein unverzichtbares Hilfsmittel für jedes molekularbiologische Labor.